Avances en conservación bovina
La conservación de recursos genéticos pecuarios mediante herramientas biotecnológicas representa una alternativa para preservar y aprovechar material genético de interés. Entre estas herramientas se encuentra la criopreservación de embriones, procedimiento que permite mantener material biológico a temperaturas ultrabajas para su posterior recuperación y utilización.
En este contexto, investigadores de diversas instituciones realizaron un estudio para comparar dos métodos de criopreservación, congelamiento lento y vitrificación, y evaluar su efecto sobre la viabilidad de embriones bovinos producidos in vitro (PIV).
El trabajo, denominado “Comparación de la vitrificación y el congelamiento lento de embriones producidos in vitro sobre la viabilidad post-criopreservación”, fue desarrollado con la participación de investigadores de la Universidad Autónoma Metropolitana, el Centro Nacional de Recursos Genéticos (CNRG) del Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP), H&A Biotecnologías en Reproducción Animal, Conservation, Genetics & Biotech, LLC, Mayville State University y la Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán de la Universidad Nacional Autónoma de México.
Desarrollo de la investigación
La investigación se llevó a cabo en las instalaciones del Centro Nacional de Recursos Genéticos (CNRG), ubicado en Tepatitlán de Morelos, Jalisco. Para la producción de los embriones se utilizaron ovarios bovinos colectados en rastro, los cuales fueron fertilizados utilizando semen de un mismo toro y se realizaron cinco réplicas experimentales.
Después de siete días de cultivo in vitro se obtuvieron embriones en estadio de blastocisto expandido. Para el estudio fueron seleccionados 200 embriones de calidad 1 y 2, de acuerdo con los criterios del IETS, los cuales fueron distribuidos en dos grupos de 100 embriones cada uno. Un grupo fue sometido al método de congelamiento lento y el otro al proceso de vitrificación.
Para el congelamiento lento, los embriones fueron sometidos a una curva de enfriamiento controlada después de un periodo de equilibrio en un medio de congelación con etilenglicol. El proceso inició a -6 °C y la temperatura disminuyó a una velocidad de 0.5 °C por minuto hasta alcanzar -32 °C, para posteriormente realizar la inmersión directa en nitrógeno líquido.
En el caso de la vitrificación, los embriones fueron expuestos a soluciones de equilibrio y vitrificación que contenían etilenglicol, DMSO y sacarosa. Posteriormente fueron colocados en dispositivos Cryotop e inmediatamente sumergidos en nitrógeno líquido.
Una vez concluida la criopreservación, los embriones fueron sometidos a los procedimientos correspondientes de descongelado o calentamiento y posteriormente cultivados durante 48 horas bajo condiciones controladas de temperatura, concentración de gases y humedad.
Evaluación de la viabilidad embrionaria
Para determinar la respuesta de los embriones después de la criopreservación, se evaluaron dos variables: la reexpansión y la eclosión embrionaria, registradas a las 24 y 48 horas posteriores al descongelado o calentamiento.
La re-expansión permite valorar la recuperación de la estructura del embrión después del proceso de criopreservación, mientras que la eclosión constituye otro indicador de su capacidad de continuar su desarrollo. El análisis estadístico de los resultados se realizó mediante la prueba de Ji-cuadrada utilizando el software Jamovi.
Resultados
La comparación de ambos procedimientos permitió identificar diferencias en la respuesta de los embriones después de la criopreservación.
De acuerdo con los resultados obtenidos, los embriones sometidos al método de congelamiento lento presentaron una mayor tasa de eclosión embrionaria posterior al descongelado en comparación con los embriones vitrificados.
Estos resultados son relevantes debido a que los embriones bovinos producidos in vitro presentan sensibilidad a los procesos de criopreservación, los cuales pueden ocasionar alteraciones a nivel morfológico y funcional. En consecuencia, la evaluación y optimización de los protocolos empleados constituye un elemento importante para favorecer la recuperación y utilización de embriones conservados.
Aportación a la conservación de recursos genéticos pecuarios
La transferencia de embriones criopreservados representa una herramienta con potencial para la diseminación de genética de valor en bovinos, al permitir conservar material biológico y utilizarlo posteriormente en programas reproductivos.
En este sentido, la identificación de procedimientos de criopreservación que favorezcan una mayor viabilidad embrionaria contribuye al desarrollo y fortalecimiento de estrategias biotecnológicas orientadas a la conservación y aprovechamiento de recursos genéticos pecuarios.
El estudio realizado en el CNRG-INIFAP aporta información sobre la respuesta de embriones bovinos producidos in vitro frente a dos métodos de criopreservación y destaca la importancia de seleccionar protocolos adecuados para favorecer su recuperación posterior al almacenamiento en nitrógeno líquido.
Referencia del trabajo
Rosas-Villaseñor, M. M.; Álvarez-Gallardo, H.; Urbán-Duarte, D.; Velázquez-Roque, A.; Kjelland, M.; Romo, S. Comparación de la vitrificación y el congelamiento lento de embriones producidos in vitro sobre la viabilidad post-criopreservación.
Instituciones participantes: Universidad Autónoma Metropolitana-Unidad Xochimilco; Centro Nacional de Recursos Genéticos-INIFAP; H&A Biotecnologías en Reproducción Animal; Conservation, Genetics & Biotech, LLC; Mayville State University; Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán-UNAM.
